實驗用離心機分為制備性離心機和分析性離心機,制備性離心機主要用于分離各種生物材料,每次分離的樣品容量比較大,分析性離心機一般都帶有光學系統,主要用于研究純的生物大分子和顆粒的理化性質,依據待測物質在離心場中的行為(用離心機中的光學系統連續(xù)監(jiān)測),能推斷物質的純度、形狀和分子量等。分析性離心機都是超速離心機。
1.制備性離心機可分為三類:
⑴普通離心機:大轉速6000rpm左右,大相對離心力近6000×g,容量為幾十毫升至幾升,分離形式是固液沉降分離,轉子有角式和外擺式,其轉速不能嚴格控制,通常不帶冷凍系統,于室溫下操作,用于收集易沉降的大顆粒物質,如紅血球、酵母細胞等。這種離心機多用交流整流子電動機驅動,電機的碳刷易磨損,轉速是用電壓調壓器調節(jié),起動電流大,速度升降不均勻,一般轉頭是置于一個硬質鋼軸上,因此地平衡離心管及內容物就極為重要,否則會損壞離心機。
⑵高速冷凍離心機:大轉速為20000~25000rpm(r/min),大相對離心力為89000×g,大容量可達3升,分離形式也是固液沉降分離,轉頭配有各種角式轉頭、蕩平式轉頭、區(qū)帶轉頭、垂直轉頭和大容量連續(xù)流動式轉頭、一般都有制冷系統,以消除高速旋轉轉頭與空氣之間摩擦而產生的熱量,離心室的溫度可以調節(jié)和維持在0~40C,轉速、溫度和時間都可以嚴格準確地控制,并有指針或數字顯示,通常用于微生物菌體、細胞碎片、大細胞器、硫銨沉淀和免疫沉淀物等的分離純化工作,但不能有效地沉降病毒、小細胞器(如核蛋白體)或單個分子。
⑶超速離心機:轉速可達50000~80000rpm,相對離心力大可達510000×g,著名的生產廠商有美國的貝克曼公司和日本的日立公司等,離心容量由幾十毫升至2升,分離的形式是差速沉降分離和密度梯度區(qū)帶分離,離心管平衡允許的誤差要小于0.1克。超速離心機的出現,使生物科學的研究領域有了新的擴展,它能使過去僅僅在電子顯微鏡觀察到的亞細胞器得到分級分離,還可以分離病毒、核酸、蛋白質和多糖等。
超速離心機主要由驅動和速度控制、溫度控制、真空系統和轉頭四部分組成。超速離心機的驅動裝置是由水冷或風冷電動機通過精密齒輪箱或皮帶變速,或直接用變頻感應電機驅動,并由微機進行控制,由于驅動軸的直徑較細,因而在旋轉時此細軸可有的彈性彎曲,以適應轉頭輕度的不平衡,而不致于引起震動或轉軸損傷,除速度控制系統外,還有一個過速保護系統,以防止轉速超過轉頭大規(guī)定轉速而引起轉頭的撕裂或爆炸,為此,離心腔用能承受此種爆炸的裝甲鋼板密閉。
溫度控制是由安裝在轉頭下面的紅外線射量感受器直接并連續(xù)監(jiān)測離心腔的溫度,以保證更準確更靈敏的溫度調控,這種紅外線溫控比高速離心機的熱電偶控制裝置更敏感,更準確。
超速離心機裝有真空系統,這是它與高速離心機的主要區(qū)別。離心機的速度在2000rpm以下時,空氣與旋轉轉頭之間的磨擦只產生少量的熱,速度超過20000rpm時,由磨擦產生的熱量顯著增大,當速度在40000rpm以上時,由磨擦產生的熱量就成為嚴重問題,為此,將離心腔密封,并由機械泵和擴散泵串聯工作的真空泵系統抽成真空,溫度的變化容易控制,磨擦力很小,這樣才能達到所需的超高轉速。
2.轉頭:
⑴角式轉頭:角式轉頭是指離心管腔與轉軸成傾角的轉頭。它是由一塊完整的金屬制成的,其上有4~12個裝離心管用的機制孔穴,即離心管腔,孔穴的中心軸與旋轉軸之間的角度在20~40度之間,角度越大沉降越結實,分離效果越好。這種轉頭的優(yōu)點是具有較大的容量,且重心低,運轉平衡,壽命較長,顆粒在沉降時先沿離心力方向撞向離心管,然后再沿管壁滑向管底,因此管的一側就會出現顆粒沉積,此現象稱為“壁效應”,壁效應容易使沉降顆粒受突然變速所產生的對流擾亂,影響分離效果。
⑵水平式轉頭:這種轉頭是由吊著的4或6個自由活動的吊桶(離心套管)構成。當轉頭靜止時,吊桶垂直懸掛,當轉頭轉速達到每分鐘200到800轉時,吊桶蕩至水平位置,這種轉頭適合做密度梯度區(qū)帶離心,其優(yōu)點是梯度物質可放在保持垂直的離心管中,離心時被分離的樣品帶垂直于離心管縱軸,而不像角式轉頭中樣品沉淀物的界面與離心管成角度,因而有利于離心結束后由管內分層取出已分離的各樣品帶。其缺點是顆粒沉降距離長,離心所需時間也長。
⑶區(qū)帶轉頭:區(qū)帶轉頭無離心管,主要由一個轉子桶和可旋開的頂蓋組成,轉子桶中裝有十字型隔板裝置,把桶內分隔成四個或多個扇形小室,隔板內有導管,梯度液或樣品液從轉頭中央的進液管泵入,通過這些導管分布到轉子四周,轉頭內的隔板可保持樣品帶和梯度介質的穩(wěn)定。沉降的樣品顆粒在區(qū)帶轉頭中的沉降情況不同于角式和外擺式轉頭,在徑向的散射離心力作用下,顆粒的沉降距離不變,因此區(qū)帶轉頭的“壁效應”極小,可以避免區(qū)帶和沉降顆粒的紊亂,分離效果好,而且還有轉速高,容量大,回收梯度容易和不影響分辨率的優(yōu)點,使超離心用于制備和工業(yè)生產成為可能。區(qū)帶轉頭的缺點是樣品和介質直接接觸轉頭,耐腐蝕要求高,操作復雜。
⑷垂直轉頭:其離心管是垂直放置,樣品顆粒的沉降距離短,離心所需時間也短,適合用于密度梯度區(qū)帶離心,離心結束后液面和樣品區(qū)帶要作九十度轉向,因而降速要慢。
⑸連續(xù)流動轉頭:可用于大量培養(yǎng)液或提取液的濃縮與分離,轉頭與區(qū)帶轉頭類似,由轉子桶和有入口和出口的轉頭蓋及附屬裝置組成,離心時樣品液由入口連續(xù)流入轉頭,在離心力作用下,懸浮顆粒沉降于轉子桶壁,上清液由出口流出。